MRNA sodeluje pri sintezi protiteles. Metode študija mRNA

trenutno oba pristopa - kemični in imunokemijska. Prvi temelji kemična frakcioniranja mRNA izoliramo iz celic, ki izdelujejo imunoglobuline. Glavni koraki so: izbira mislomnyh membrano vezan polyribosomes celic ali mikrosomskimi (Stavnezer AE 1971- Milstein in e 1972 ....) - ekstrakcijo RNA iz njih pod pogoji, ki preprečuje degradatsiyu- gradienta RNK gostote frakcioniranje saharozy- izbor frakcije, ki ustrezajo velikosti predvidenega čiščenja mRNA s kolonsko ribosomske RNA z oligo ((1T) - ali poli (U) -cellulose (ali Sepharose), le bogati zamude adennlovymi baze mRNA (poliA mRPK) in študija bioloških dejavnost namenska ip delnice.

V nekaterih primerih, ki nadalje čiščenje priprave mRNA Rabljeni polnakrplamidnom elektroforeza gel v prisotnosti 99% formamida (Farace npr. a., 1976- Matthyssens pobrati. a., 1976). S temi in drugimi različic zgornje sheme je trenutno v uporabi, ki ga je velika večina raziskovalcev. Dobitek posameznik poliA mRNA, običajno je 0,01% zneska RNA uvedenega (Brownlee e. A., 1973). Kot rezultat, trenutno dodeljena NZ plasmacytomas MOPC 70E, MOPC 21, MOPC 41 več mRNA, ki kodira tako H in L-verige. Čistost večino teh zdravil ne presega 40-60%.

Samo ena skupina avtorji Nedavno je uspelo na tak način, da dobimo mRNA za več kot 90% čistoto (Matthyssens e. a., 1976). To ni presenetljivo. Uporabljena metoda temelji najprej na ločitvi RNA molekul glede na njihovo molekulsko maso in, po drugi strani, na oddelku za populacije zaliti, ki vsebujejo RNA, odvzeta iz njega.

Seveda, lahko celice predstavljajo število mRNA s podobnimi lastnostmi, ki niso povezani z imunoglobulini. Vsi ti neizogibno kontaminirajo RNA priprave posameznega imunoglobulinov RNA. Očitno je, da bi bilo bodisi večje ali manjše, odvisno od relativnega deleža imunoglobulina celice teh nečistot sintetizirane.

Zato je za mRNA izolacija od mielomi, sinteza imunoglobulin v katerem 30-40% sintezo vseh proteinov v splošnem Ta metoda se lahko ispolzovan- istočasno izolirati mRNA, ki kodira sintezo imunoglobulina od normalnih limfnih tkiv, zlasti sestavka zelo heterogeno celic v vranici je očitno neprimerna.

še veliko več perspektiva, Z našega vidika je to imunokemijska pristop k reševanju tega problema. Njegova prednost je v tem, da je že prvi korak frakcionacijo vključuje strogo poseben izbor posamezne polyribosomes uporabo protitelesa proti proteinom teh polyribosomes sintetiziranega. Obstajajo tri različice te metode. Izvor - odlaganje polyribosomes protitelesa na protein sintetiziran v prisotnosti nosilca, tj istega proteina (koprecipitacijo) .... (Delovitch in e, 1972- Laskov, Mitelman, 1975).

Drugič - predelava polyribosomes Protitelesa proti proteinu, ki jih in obarjanja dobljene kompleksno protitelesi proti protiteles (posredna padavinah) (Schechtcr, 1973, 1974a), sintetiziranega. In tretji - črpajo posamezne polyribosomes preko immunosorbents vsebujejo kovalentno ali nekovalentno povezane protitelo sintetiziramo na polyribosomes proteina (Sidorov et al, leta 1973 Sidorova s, 1974- Lubimova sod, 1975, ....). Iz bil tako dobljen posamezni polyribosomes tako ali drugače polysomal RNK ekstrahirali in mRNA odstranimo s prehajanjem zmesi skozi kolono s oligo- ali poli (U) -cellulose. Uporaba imunokemijsko pristop uspelo doseči mRNA pripravki približno 95% čistost.